美國(guó)nanodrop one超微量分光光度計(jì)使用方法
美國(guó)nanodrop one光度計(jì)使用
Nanodrop是實(shí)驗(yàn)室中常見的分光光度計(jì)。與傳統(tǒng)需要比色皿的分光光度計(jì)相比，Nanodrop所需樣品的體積大大減少，只需要2 μL，同時(shí)也大大降低了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備以及清洗的時(shí)間。這些優(yōu)勢(shì)使得科研人員能夠在一分鐘內(nèi)檢測(cè)多個(gè)樣品。當(dāng)然如果你有更多的樣品，還嫌效率不夠高，你可以選擇應(yīng)用Nanodrop 8000系統(tǒng)，它能夠同時(shí)檢測(cè)8個(gè)樣品。
Nanodrop能夠在包括紫外及可見光區(qū)域在內(nèi)的光譜范圍內(nèi)檢測(cè)樣品的吸光度信號(hào)。在實(shí)驗(yàn)開始前，需要在儀器的軟件內(nèi)設(shè)置檢測(cè)樣品的種類，包括蛋白質(zhì)，DNA, RNA等。根據(jù)吸光度,能夠計(jì)算樣品的濃度。DNA及RNA 在260 nm處有吸收度，蛋白質(zhì)在280 nm處有吸收峰值。濃度與吸光度的對(duì)應(yīng)關(guān)系見下表。當(dāng)然表中濃度與吸光度對(duì)應(yīng)關(guān)系成立的前提是樣品必須具有很高的純度。樣品純度可以通過A260/280判定，其臨界值可參考下表。 大家可能注意到，RNA的A260/280比值要比DNA的值高一些，這是因?yàn)閴A基U的A260/280的比值要比堿基T的A260/280比值更高。
吸光度 | 樣品 | 樣品濃度 | 高純度樣品標(biāo)準(zhǔn)（A260/280 ） |
A260 =1 | 雙鏈DNA | 50 μg/ml | <1.8 |
單鏈DNA | 33 μg/ml | ||
單鏈RNA | 40 μg/ml | >2.0 | |
A280 = 1 | 蛋白質(zhì) | 1 mg/ml | <0.6 |
對(duì)Nanodrop檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生直接影響的因素就是樣品的純度。A260/280是檢測(cè)樣品純度的一個(gè)指標(biāo)，但這個(gè)參數(shù)只衡量了蛋白質(zhì)與核酸之間相互污染的情況。沒有考慮DNA與RNA之間彼此污染以及其他物質(zhì)污染的情況，比如苯酚在270 nm附近具有較大的吸光值。
因此在利用Nanodrop檢測(cè)核酸濃度的時(shí)候，除了A260/280外，A260/230也是檢測(cè)樣品純度的一個(gè)指標(biāo)，高純度DNA和RNA的兩個(gè)臨界值同樣是1.8以及2.0。A260/230在2.0-2.2之間是合理的數(shù)值。對(duì)于純的核酸，A260/230的值通常大于A260/280的值。核酸提取過程中殘留的有機(jī)物通常會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。如果檢測(cè)結(jié)果顯示230nm處具有很大的吸光值，樣品很有可能被EDTA，碳水化合物或者硫氰酸胍等物質(zhì)污染了。
Nanodrop的檢測(cè)范圍。對(duì)于核酸來說，Nanodrop的檢測(cè)濃度范圍在2ng-15μg/μL之間。所以當(dāng)樣品的濃度很低時(shí)，比如從單個(gè)或少量細(xì)胞中提取的DNA或RNA，利用Nanodrop來測(cè)量濃度可能就不適合了。這時(shí)需要考慮其他的核酸定量方法比如熒光染料的方法。
此款符合人體工程學(xué)的獨(dú)立式分光光度計(jì)具有高分辨率和觸摸屏界面設(shè)計(jì)，使您離研究目標(biāo)更進(jìn)一步。 強(qiáng)大的自動(dòng)調(diào) 節(jié)光程技術(shù)有助于準(zhǔn)確測(cè)量濃縮樣品而無需稀釋。
Acclaro 樣品智能技術(shù)
Acclaro 技術(shù)可以在提供準(zhǔn)確的定量測(cè)定的同時(shí)，增強(qiáng)用戶對(duì)樣品質(zhì)量的了解。 對(duì)污染物的早期鑒別能夠避免下游應(yīng)用的失敗，從而節(jié)省故障排除的時(shí)間。
在數(shù)秒內(nèi)驗(yàn)證樣品結(jié)果 - 鑒別樣品污染物并獲得矯正的濃度結(jié)果。
通過警報(bào)獲取信息 – 通過提供相應(yīng)的技術(shù)支持和解決問題向?qū)В瑥亩@得樣品質(zhì)量的即時(shí)反饋。
依靠準(zhǔn)確結(jié)果——采用嵌入式傳感器和數(shù)字影像分析技術(shù)，確保測(cè)量完整性。
NanoDrop One/NanoDrop OneC 特點(diǎn)
同時(shí)包含基座和比色皿檢測(cè)模塊，以擴(kuò)展實(shí)驗(yàn)靈活性和擴(kuò)大動(dòng)態(tài)范圍。
測(cè)量稀釋樣品，執(zhí)行動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)并獲取細(xì)菌培養(yǎng)物的光密度測(cè)量結(jié)果。
比色皿檢測(cè)模塊包括溫度控制和攪拌區(qū)域。
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